Les immunoglobulines

Immunoglobuline = glycoprotéine soluble

Comment les purifier ?

- centrifuger un échantillon de sang : surnageant = sérum, culot = caillot

- électrophorèse sur acétate de cellulose

- quantification par un densitomètre

Isotopes : déterminants de la région constante qui distinguent chaque classe d'Ig au sein d'une espèce.

Allotypes : déterminants de la région constante qui distinguent les Ig d'une même classe.

Idiotypes : déterminants des régions variables spécifiques de chaque antigène.

Liaisons anticorps-antigène :

- spécifiques

- réversibles (chaleur, pH, concentration...)

- affinité

- avidité (l'apparition d'une liaison Ac-Ag augmente la probabilité d'interaction sur un second site).

Agglutination = pontage des antigènes entre eux par les anticorps.

1) si l'antigène est particulaire, insoluble, : agglutination active

si l'anticorps est agglutinant : agglutination active directe

si l'anticorps n'est pas agglutinant : agglutination active indirecte

2) si l'antigène est rendu artificiellement particulaire (sur billes de latex ou sur des hématies) : agglutination passive

Paramètres influant :

- la classe d'Ig

- le nombre d'épitopes antigéniques

- le milieu (température, pH et la force ionique).

Réactions de neutralisation :

Réactions de précipitation :

Définition : réactions entre des Ag et des Ac menant à des précipités insolubles.

1) En milieu liquide :

Test de l'anneau

Immunoturbidimétrie : les complexes absorbent la lumière (Beer-Lambert et gamme d'étalonnage).

2) En milieu gélifié

Immunodiffusion simple unidimensionnelle : OUDIN

= technique de l'anneau mais dans un milieu gélifié

immunodiffusion bidimensionnelle simple : MANCINI

immunodiffusion bidimensionnelle double : OUCHTERLONY

les anticorps et les antigènes sont déposés dans des puits d'une gélose.

électrophorèse : OUCHTERLONY accéléré par un champ électrique

Immunoélectrophorèse : technique de GRABAR

Technique de Laurell : MANCINI accéléré

Immunofixation

Echantillon avec antigènes variés déposé plusieurs fois dans des puits contigus d'un gel d'agarose. Un anticorps donné est déposé sur chaque piste.

Réactions utilisant des anticorps marqués :

1) Méthodes ELISA (enzym-linked immunosorbant assay) :

- signal stable au cours du temps

- utilise un spectro

- très sensible

Réactions compétitives :

Après sensibilisation par un Ag à concentration connue, on ajoute en même temps l'antigène recherché et l'anticorps conjugué.

Compétition entre l'Ag fixé sur le support et l'Ag recherché.

2) Immunofluorescence :

- signal qui diminue très vite

- besoin de microscope à fluorescence ou lasers

- méthode peu sensible

3) Radioactivité :

- signal qui décroit lentement au cours du temps

- problème de la gestion des déchets

- protection individuelle + surveillance médicale obligatoire

- détection par autoradiographie

- méthode peu sensible si les concentrations sont très différentes

Immunochromatographies :

Le sang est déposé sur une bande et migre par capillarité. Si Ag présent : formations de complexes, sinon les Ac marqués restent libres et ne migrent pas : pas de signal dans la zone de contrôle.

Production d'anticorps polyclonaux :

Anticorps polyclonaux : anticorps dirigés contre un même antigène mais contres des déterminants antigéniques différents. L'antigène a plusieurs épitopes différents.

Production : immunisation d'un animal puis purification.

Immunogénéicité : capacité à déclencher une réponse immunitaire.

Adjuvents : améliorent la réponse immunitaire

Production d'anticorps monoclonaux :